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                  臨床基因擴增實驗室案例

                  作者:admin 出處:科瓦特發表時間:2016-08-29 21:30:00
                   

                  項目客戶:山東大學附屬生殖醫院
                  項目名稱:臨床基因擴增檢驗實驗室,分子遺傳室
                  項目面積:17460平方米
                  項目地點:山東濟南
                  建設單位:中山市科瓦特實驗室
                  項目內容
                  實驗室裝修工程
                  實驗室空調與潔凈工程
                  實驗室通風工程
                  實驗室供氣系統
                  實驗室純水系統
                  實驗室環保系統

                  以下為科瓦特實驗室驗收后部分案例現場展示

                  臨床基本擴增實驗室
                               實驗室消毒區與傳遞區
                  基本實驗室
                  實驗室裝修細節圖:
                  擴增實驗室緩沖區PCR實驗室
                             實驗室走廊                                                      主實驗室
                  實驗室空調與照明PCR實驗室準備區
                           實驗室通風過濾與照明                                       PCR實驗室準備區
                  分子遺傳室實驗室遺傳基因研究區
                             分子遺傳室                                                   遺傳基因研究區
                  PCR樣本分析區PCR清洗區
                                  PCR標本制備區                                       PCR清洗區
                   1 概述 
                  臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗,這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規范的操作
                  為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性
                  和安全性起到至關重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局,空調通風系統設計、氣
                  流控制和污染的防制幾個方面對 
                  實驗室設計中的主要特點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核
                  心問題是如何避免污染。因此,實驗室的平面布局、空調通風系統設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問
                  題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。 

                   
                  2 PCR實驗室平面布局 
                  臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混
                  合物配制
                  和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,
                  即只能從試劑貯存
                  和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區。 各實驗區之
                  間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。 

                  PCR實驗室平面布局圖
                                                 PCR實驗室平面布置示意圖如圖1所示。 
                       
                  3 實驗室空調通風系統設計及壓力控制 
                  PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣
                  流組織形式。
                  同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。 
                   
                  3.1 試劑貯存和準備區 
                  該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材
                  料應直接運
                  送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試
                  劑。 
                  對與氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求。 
                   
                  3.2 標本制備區 
                  該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA
                  時cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污
                  染。另外,由于在加樣操作中可能會
                  發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。 
                   
                  3.3 擴增反應混合物配制和擴增區 
                  該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的
                  加入和主反應混合
                  液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中,
                  通常在第一輪擴增后必須打開反應
                  管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。 
                  本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,
                  應盡量減少在本區
                  內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。 
                   
                  3.4 擴增產物分析區 
                  該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。 
                  本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴
                  增產物從本區擴散
                  至其它區域。 
                   
                  4 污染的預防與控制 
                  PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污
                  染;天然基因組DNA
                  的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到
                  找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,
                  需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源
                  不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是
                  預防,而不是排除。 
                   
                  4.1 工作區域的嚴格劃分 
                  (1)各個實驗區域設置合理; 
                  (2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個不同實驗區域設
                  備物品、試劑等發生
                  混淆。 
                   
                  4.2 合理的系統設置 
                  (1)合理的空調通風系統設置,盡量采用全送全排的空調系統; 
                  (2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。
                   
                  4.3 規范的操作 
                  (1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗
                  的工作; 
                  (2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效
                  地防止污染的措施; 
                  (3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表面進行
                  擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。 
                   
                  4.4 嚴格的管理 
                  (1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立
                  的通道和進出整個實驗區
                  的門; 
                  (2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的
                  工作服帶至其它區域; 
                  (3)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。 
                  (4)擴增產物分析區是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒
                  后在遠離實驗室的地方棄
                  掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等; 
                  (5)擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。 
                   
                  4.5 完備的實驗室配套設施 
                  完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備
                  和儀器,如超凈工作臺、
                  離心機、加樣器等。

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                  此文關鍵字:基因擴增實驗室。

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